Sterilizacija u autoklavu uključuje tri različite faze:
Uklanjanje vazduha: U ovoj početnoj fazi, autoklav uklanja vazduh iz komore. Vakum pumpa usisava vazduh, stvarajući okruženje niskog pritiska. Ovaj korak osigurava da para može efikasno prodrijeti u sva područja i doći do tereta za pravilnu sterilizaciju.
Sterilizacija: Kada se ukloni vazduh, temperatura unutar autoklava dostiže tačan nivo. Zasićena para, nastala pod pritiskom, ubija bakterije, viruse i druge mikroorganizme. Uobičajena temperatura za sterilizaciju je 121 stepen pri pritisku od 1,1 kilogram/kvadratni centimetar (kg/cm²) (ekvivalentno 15 funti/kvadratnom inču (lb/in²)). Trajanje autoklaviranja varira u zavisnosti od zapremine opterećenja, ali se općenito smatra da iznosi 15-20 minuta.
Hlađenje/sušenje: Nakon sterilizacije, para se oslobađa, a autoklav se hladi. Kada je temperatura sigurna, vrata se otvaraju i sterilizirani predmeti su spremni za upotrebu.
Efikasno uklanjanje vazduha, pravilno pozicioniranje predmeta i adekvatno vreme zagrevanja su ključni za uspešnu sterilizaciju u autoklavu.